Для работы в бактериологической лабо­ратории используют л абораторную посуду: Чашки Петри, пробирки различного размера, пастеровские пипетки, колбы, бактериологичес­кие петли, инструменты, предметные и покровные стекла, карандаш по стеклу (стеклограф), стерилизаторы, дистилляторы и т. п.

Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течение 15-20 мин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллиро­ванной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия (100 частей кислоты, 50 частей дихромата калия на 1000 частей воды), затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %-ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф. Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с при­тертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу.

Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, завертывают по 10- 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязы­вают от попадания пыли.

В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полос­кой бумаги шириной 4-5 см. При этом концы пипеток должны быть тщательно завернуты бумагой.

В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специаль­ные пеналы.

Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве.

Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясопептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат.

Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют.

Оборудование для ветеринарной лаборатории включает весь арсенал технических средств, применяемых для проведения анализов, изучения биофизиологических и биохимических процессов в организме животного, разработки и испытания новых ветеринарных препаратов.

Перечень исследований, проводимых современными ветеринарными лабораториями, многообразен и включает все виды биохимического, бактериологического, серологического, цитологического, гормонального, патоморфологического анализа. Возможности ветеринарии сегодня охватывают гематологию, иммунологию, иммунохимию, коагулологию, гистологию и многие другие научные направления.

Биологические объекты отличаются сложной многокомпонентной структурой, элементы которой могут никак не проявлять себя в нормальных условиях из-за малого размера или нейтральных химических свойств. Для определения состава биопроб применяют оптические устройства (микроскопы) и аналитическое оборудование, позволяющее исследовать свойства крови, мочи, образцов тканей, других биоматериалов на микроуровне.

Без применения специальной аппаратуры не обходится и такой распространенный вид лабораторной деятельности, как изучение мочи. Специальные анализаторы позволяют выявить присутствие в моче кристаллов мочевой кислоты, трипельфосфатов, оксалатов кальция. Для визуального изучения структуры осадка используются микроскопы. Полученные данные помогают диагностировать непроходимость мочевыводящих протоков, мочекаменную болезнь, почечную недостаточность и другие нарушения функции мочевыделения.

Для выполнения гистологических исследований применяют специальное оборудование для изготовления и обработки образцов тканей: микротомы и криостаты, автоматы для парафиновой заливки и окрашивания препаратов, устройства гистологической проводки.

С появлением мобильных лабораторно-диагностических комплексов стало возможным проведение выездных исследований, что очень удобно для обслуживания ферм и племенных хозяйств.

Кроме аналитических технических средств, ветеринарная лаборатория нуждается в качественных источниках освещения, бактерицидных лампах и функциональной мебели: рабочих столах и тумбах разного назначения, штативах, шкафах для посуды и инструмента, дезинфекционном и стерилизующем оборудовании, сухожаровых шкафах и автоклавах.

Лабораторный анализ – основной источник диагностической информации в ветеринарии, необходимое условие для постановки верного диагноза и назначения адекватной терапии. Надёжное сертифицированное ветеринарное оборудование и функциональная мебель, адаптированная к специфике деятельности ветеринарной лаборатории, являются залогом высокой объективности, точности и достоверности результатов проводимых исследований.

1.1.1. Подготовка посуды

Анализ сырья, полуфабрикатов и готовой продукции проводится в лабораториях с использованием химической посуды. Наиболее часто в аналитических лабораториях пользуются стеклянной посудой. Также применяют посуду из кварца, фарфора, платины, полиэтилена, реже из других материалов.

Чистота химической посуды, особенно мерной, имеет очень большое значение в анализе. Посуду можно считать чистой, если при выливании из нее воды на внутренних стенках не остается капель. Это хорошо видно, если после споласкивания дистиллированной водой посуду перевернуть вверх дном. Мытье химической посуды сводится не только к удалению загрязнений, но и к обезжириванию ее внутренних стенок.

Для выбора способа мытья посуды в каждом отдельном случае необходимо следующее:

знать свойства загрязняющих посуду веществ;

использовать растворимость загрязнений в воде (холодной или горячей), в растворах щелочей, различных солей или кислот, органических растворителях;

использовать свойства окислителей, окислять в определенных условиях органические и неорганические загрязнения, разрушать их с образованием легко растворимых соединений;

для мытья могут быть использованы все вещества, обладающие поверхностно-активными свойствами (мыло, синтетические моющие вещества, моющие глины и пр.);

если загрязняющий посуду осадок химически стоек, для его удаления можно применить механическую очистку (при помощи ершей и пр.);

для мытья посуды необходимо выбирать оптимальный по моющим качествам и по цене реактив.

Нужно всегда помнить о технике безопасности и возможности несчастных случаев при мытье посуды, особенно если работающий не знаком со свойствами загрязнений. Каждый новый работник лаборатории должен быть ознакомлен с правилами техники безопасности.

Механические способы мытья применяют, если на стенках и дне посуды есть налет каких-либо солей или осадок. В этом случае используют ершик или щетку, предварительно смочив их водой. При работе с ершиком нужно следить, чтобы нижний конец его не ударялся о дно или стенки посуды, так как этим концом можно выбить дно или проломить стенку. Чтобы предотвратить возможность разбивания посуды металлическим концом ершика, на кончик его нужно надеть кусочек резиновой трубки подходящего размера. Посуду тщательно моют теплой водой, а затем 2 - 3 раза ополаскивают дистиллированной водой, для удаления солей, содержащихся в водопроводной воде. Выпускают машины для мытья лабораторной посуды.

Мытье паром используют, если посуда загрязнена жировыми веществами. Это самый эффективный способ мытья посуды. Редкое применение этого метода объясняется его длительностью. Если водой колбу можно вымыть за 5 - 10 минут, то для мытья паром потребуется не менее часа.

Для выполнения особо точных работ, посуду предварительно моют одним из обычных способов, а затем пропаривают 10 - 15 минут.

Мытье органическими растворителями (диэтиловый эфир, ацетон, спирты, бензин и т.д.) применяют для удаления смолистых и органических веществ, которые не растворяются в воде. Также можно использовать пары органических растворителей. Большинство органических растворителей огнеопасно, поэтому работать с ними необходимо вдали от огня. Промытую органическими растворителями посуду обрабатывают хромовой смесью или другими окислителями.

Мытье моющими средствами такими, как мыло, стиральные порошки, кальцинированная и питьевая сода, дает хороший эффект в сочетании с кусочками бумаги, которые механически удаляют приставшие загрязнения. Недопустимо для очистки посуды использовать песок, т.к. он наносит царапины, наличие которых снижает термическую устойчивость посуды.

Для мытья стеклянной и фарфоровой посуды известно несколько рецептов моющих смесей.

Хромовая смесь – одно из лучших моющих средств. Для приготовления хромовой смеси используют концентрированную серную кислоту и дихромат калия (до 5% от массы). Дихромат калия растирают в фарфоровой ступке в порошок, переносят в фарфоровую чашку, добавляют серную кислоту и осторожно нагревают на водяной бане до полного растворения. Хромовая смесь является средством многократного использования. Признаком непригодности хромовой смеси является изменение цвета раствора из красно-оранжевого в зеленый.

При мытье хромовой смесью посуду вначале ополаскивают водой, затем наливают слегка подогретую хромовую смесь до 1/4 – 1/3 объема, и осторожно вращая посуду, смачивают ее внутренние стенки, после чего смесь выливают в ту же посуду, в которой она хранится. Посуду оставляют постоять некоторое время, после чего моют теплой водой, а затем два-три раза ополаскивают дистиллированной водой. Сильно загрязненные горлышки колб, пипеток и бюреток можно поместить в стакан и залить хромовой смесью на некоторое время. При работе с хромовой смесью необходимо использовать средства индивидуальной защиты, так как она вызывает сильные ожоги.

Использование хромовой смеси неэффективно, если посуда загрязнена парафином, керосином, минеральными маслами, солями бария.

Карбонат натрия ( Na 2 CO 3 ) применяют в виде концентрированного (30 – 40 %) раствора подогретого до 70° С. Это средство более безопасно в работе, но обладает меньшей эффективностью. После соды посуду многократно ополаскивают водопроводной водой, а затем 2 - 3 раза дистиллированной.

В качестве других окислителей для мытья посуды могут быть использованы смесь соляной кислоты и перекиси водорода; 5 % раствор перманганата калия.

Концентрированную серную кислоту и растворы щелочей (до 40%) используют для мытья посуды, если она загрязнена смолистыми веществами.

Чаще всего на практике используют смешанные способы мытья посуды.

Сушить посуду после мытья следует далеко не всегда. В некоторых случаях вымытую посуду перед использованием достаточно ополоснуть дистиллированной водой или раствором, для которого она предназначена. Если же посуда должна быть хорошо высушена, ее помещают в сушильный шкаф. Пользоваться посудой можно лишь после того, как она остынет и примет температуру рабочего помещения. Полиэтиленовую посуду сушат при комнатной температуре.

К исследованию проб в лаборатории необходимо приступить как можно быстрее с момента отбора.

Анализ следует провести в течение 2-х часов после забора.

Если не может быть соблюдено время доставки пробы и температура хранения, анализ пробы проводить не следует.

Подготовка посуды к анализу

Лабораторная посуда должна быть тщательно вымыта, ополоснута дистиллированной водой до полного удаления моющих средств и других посторонних примесей и высушена.

Пробирки, колбы, бутылки, флаконы должны быть заткнуты силиконовыми или ватно-марлевыми пробками и упакованы так, чтобы исключить загрязнение после стерилизации в процессе работы и хранения. Колпачки могут быть металлические, силиконовые, из фольги или плотной бумаги.

Новые резиновые пробки кипятят в 2%-м растворе натрия двууглекислого 30 минут и 5 раз промывают водопроводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки 30 минут кипятят в дистиллированной воде, высушивают, заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют в паровом стерилизаторе. Резиновые пробки, использованные ранее, обеззараживают, кипятят 30 минут в водопроводной воде с нейтральным моющим средством, промывают в водопроводной воде, высушивают, монтируют и стерилизуют.

Пипетки со вставленными тампонами из ваты должны быть уложены в металлические пеналы или завернуты в бумагу.

Чашки Петри в закрытом состоянии должны быть уложены в металлические пеналы или завернуты в бумагу.

Подготовленную посуду стерилизуют в сухожаровом шкафу при 160-170°С 1 час, считая с момента достижения указанной температуры. Простерилизованную посуду можно вынимать из сушильного шкафа только после его охлаждения ниже 60 °С.

После выполнения анализа все использованные чашки и пробирки обеззараживают в автоклаве при (126±2)°С 60 минут. Пипетки обеззараживают кипячением в 2%-м растворе NaHC03.

После охлаждения удаляют остатки сред, затем чашки и пробирки замачивают, кипятят в водопроводной воде и моют с последующим ополаскиванием дистиллированной водой.

В чашки Петри заливают заранее приготовленный питательный агар ЭНДО и ставят для застывания.

Метод мембранных фильтров

Mетод определения количества клеток E.coli в единице объема жидкости (коли-индекс); суть метода заключается в фильтровании анализируемой жидкости через мембранные фильтры, задерживающие бактерии, после чего эти фильтры помещают на твердую питательную среду и подсчитывают выросшие на ней колонии бактерий.

Подготовка мембранных фильтров

Мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями завода - изготовителя.

Подготовка фильтровального аппарата

Фильтровальный аппарат обтирают ватным тампоном, смоченным спиртом, и фламбируют. После охлаждения на нижнюю часть фильтровального аппарата (столик) кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его верхней частью прибора (стаканом, воронкой) и закрепляют устройством, предусмотренным конструкцией прибора.

При методе мембранных фильтров определенное количество воды пропускается через специальную мембрану с размером пор порядка 0.45 мкм.

В результате, на поверхности мембраны остаются все находящиеся в воде бактерии. После чего мембрану с бактериями помещают на специальную питательную среду (ЭНДО). После чего чашки Петри переворачивали и помещали в термостат на определенное время и температуру. Общие колиформные бактерии (ОКБ) - инкубировали при температуре 37 +/- 1°C в течение 24-48 ч. Для определения термотолерантных бактерий посев производят в среду, предварительно прогретую до температуры 44°С, и инкубируют при этой же температуре в течение 24 часов.

Среда светочувствительна. Поэтому все засеянные чашки предохраняют от света.

Во время этого периода, называемого инкубационным, бактерии получают возможность размножиться и образовать хорошо различимые колонии, которые уже легко поддаются подсчету.

По окончании сроков инкубации производят просмотр посевов:

а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для бактерий кишечной группы (губчатые, пленчатые с неровной поверхностью и краем), позволяет на этом этапе анализа закончить исследования (18-24 ч) с выдачей отрицательного результата на присутствие кишечных палочек в анализируемом объеме воды;

б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском или без него, розовых и прозрачных), исследование продолжают и микроскопируют.

Если рост круглых колоний малинового цвета с металлическим блеском диаметром 2,0-3,0 мм - Escherichia coli 3912/41 (055:K59);

Если рост круглых колоний малинового цвета диаметром 1,5-2,5 мм с нечетким металлическим блеском - Escherichia coli 168/59 (O111:K58)

Химико-лабораторная посуда для клинических и биологических исследований изготавливается из стекла различных марок в зависимости от назначения. В лабораториях используют посуду: общего назначения: пробирки, химические стаканы, воронки простые, делительные, плоскодонные колбы, конические колбы Эрленмейера, кристаллизаторы, промывалки, холодильники прямые и обратные, сифоны для переливания жидкостей и др.;
специального назначения: аппарат Киппа, эксикаторы, капельницы, каплеуловители, круглодонные колбы, колбы для определения азота по Кьельдалю, колбы Вюрца, Клайзена и другие для перегонки жидкостей, склянки Тищенко для промывания и высушивания газов, хлоркальциевые трубки и др.;
мерную: мерные колбы, мерные цилиндры, мензурки, пипетки Мора, градуированные пипетки, микропипетки, бюретки и др.
Кроме стеклянной при исследованиях применяют также фарфоровую посуду (стаканы, выпарительные чашки, ступки, тигли, воронки Бюхнера, фарфоровые сетки), высокоогнеупорную посуду, металлическое оборудование (штативы, треноги, зажимы, пинцеты, щипцы, тигли и др.) и инструментарий (ножницы, ножи и др.).
Для соблюдения точности поставленного эксперимента следует освоить технику лабораторных работ, правила обращения с посудой и приборами; правила безопасности при работе в химических лабораториях по одному из специальных руководств.
Особенно большое значение для лабораторных исследований имеет чистота химической посуды: без выполнения этого условия нельзя быть уверенным в точности результата. При мытье посуды необходимо помнить о правилах безопасности в лаборатории, соблюдать большую осторожность при работе с концентрированными растворами щелочей, кислот, окислителей.
В зависимости от степени загрязнения лабораторную посуду моют водой, паром, органическими растворителями (диэтиловый эфир, этанол, ацетон, бензин, четыреххлористый углерод и др.), хромовой смесью, другими моющими средствами. Стеклянная посуда считается чистой, если при ополаскивании водой на стенках не образуется капель и вода стекает тонкой равномерной пленкой.
Если посуда не загрязнена смолой, жирами и другими не растворяющимися в воде веществами, ее моют теплой водой, а для удаления остатков твердых загрязнений используют щетки, волосяные ерши, стеклянные палочки с кусочком резиновой трубки, надетой на ее нижний конец. После мытья водопроводной водой посуду обязательно 2-3 раза ополаскивают дистиллированной водой.
Длительным, но эффективным способом является мытье паром. Паром посуду обрабатывают также после предварительного мытья другими способами. В большую колбу (вместимостью 3-5 л) на дно помещают стеклянные капилляры, до половины наливают ее водой, плотно закрывают пробкой, в которую вставлены высокая трубка для вывода пара и воронка для стекания конденсата. На трубку надевают (или укрепляют над трубкой в штативе) предназначенный к мытью сосуд.
К самым эффективным моющим средствам относится хромовая смесь, содержащая два сильных окислителя: Н2804 и К2СГ2О7. Хромовая смесь, или «хромпик», - это 5%-ный по массе раствор дихромата (бихромата) калия (К2СГ2О7) в концентрированной серной кислоте. Для приготовления хромовой смеси в концентрированную серную кислоту плотностью 1,84 кг/м3 вносят измельченный порошок дихромата калия и осторожно нагревают в фарфоровой чашке (или фарфоровом стакане) при помешивании стеклянной палочкой до растворения дихромата. На 100 мл концентрированной серной кислоты необходимо 9,2 г кристаллического К2Сг207. Хромовую смесь хранят в фарфоровой посуде с крышкой.
При мытье хромовой смесью посуду (колбы, стаканы больших размеров) сначала очищают с помощью горячей воды и ерша, затем в каждый сосуд вливают небольшой объем хромовой смеси и, осторожно вращая его, полностью смачивают внутренние стенки. Затем хромовую смесь выливают обратно в ту же емкость, в которой она хранится, посуду тщательно обмывают (7-9 раз) водопроводной водой и ополаскивают 3 раза дистиллированной. Сильно загрязненную посуду моют хромовой смесью 2-3 раза или оставляют стоять с хромовой смесью на несколько часов. Мелкую посуду целиком помещают в фарфоровый сосуд с хромовой смесью и оставляют на 20-30 мин, затем вынимают тигельными щипцами, аккуратно складывают в фарфоровую или эмалированную емкость и ставят под струю теплой воды. После полного удаления остатков хромовой смеси еще раз тщательно ополаскивают отдельно каждый предмет.
Хромовую смесь в лаборатории используют длительное время - до изменения ее цвета из темно-оранжевого в темно-зеленый. С хромовой смесью нужно обращаться очень осторожно, при мытье пипеток и трубок следует пользоваться резиновой грушей. Для большего эффекта посуду моют подогретой до 45-50 °С хромовой смесью. Делают это очень осторожно на горячей водяной бане, или предварительно посуду ополаскивают горячей водой. Посуду после крови,

молока, жира перед обработкой хромовой смесью моют в крепкой (до 40 %) щелочи.
В целях дольшего сохранения окислительных свойств хромовой смеси широко применяют такой способ: химическую посуду моют синтетическими моющими смесями (стиральными порошками), затем каждый предмет не менее 15 раз обмывают (наливая и выливая) водопроводной водой, после чего приступают к мытью хромовой смесью.
Если посуда загрязнена воском, парафином, минеральными маслами, хромовую смесь не применяют, посуду моют паром или органическими растворителями. Смолистые вещества удаляют также 40%-ными растворами щелочей.
Хорошее моющее средство (например, для бюреток) - смесь концентрированной серной кислоты и пергидроля (30%-ный раствор Н2О2) в объемном соотношении 5:1. Она служит также для многократного использования.
Пластиковую посуду для взятия проб крови и других материалов моют синтетическими моющими смесями, затем промывают до 20 раз водопроводной водой и ополаскивают 2-3 раза дистиллированной водой. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки и др.) после снятия упаковки используют без мытья. Для аналитических исследований пластиковую посуду использовать нельзя.
После мытья посуду высушивают на воздухе (на специальной доске с колышками) или в сушильном шкафу.
Многие современные методики исследований содержат сведения о подготовке посуды к данному анализу, в том числе о моющих средствах. Насколько важен фактор чистоты посуды для результатов анализа свидетельствует следующий факт: в одном НИИ по результатам анализа обнаружили лучевую болезнь, что оказалось ошибочным; при детальном разборе анализа выяснилось, что лаборант нарушил методику мытья посуды, вместо синтетической моющей смеси для экономии использовал раствор соды, недостаточно смывая его водой, в результате эритроциты адсорбировались на стенках пробирок, «свидетельствуя» о гемолизе крови.